在这之前,人们一直认为在蜱虫中进行基因编辑是不可能的,而且有充分的理由。对蜱虫卵的注射非常棘手,因为包含它们的卵子外面有一层坚硬的东西,里面的压力水平很高,而且还涂有母亲用所谓的Gené的器官创造的蜡质层。
该研究的共同第一作者、内华达大学里诺分校的分子生物学家Monika Gulia-Nuss说:“尽管蜱虫有能力获得并传播一系列衰弱的病原体,但对蜱虫的研究已经落后于其他节肢动物载体,如蚊子,主要是因为在应用现有的遗传和分子工具方面存在挑战。”
Gulia-Nuss和她的研究团队,包括来自马里兰大学和宾夕法尼亚州立大学的科学家,相信他们终于破解了这个“密码”。这项突破性技术的第一步涉及到烧蚀Gené的器官以防止蜡质涂层的形成。然后用化学品苯扎氯铵和氯化钠处理蜱虫卵,既消除坚韧的保护层,又降低蜱虫卵内的压力。
Gulia-Nuss说:“我们能够仔细地解剖发情的雌性蜱虫,通过手术去除负责给卵子涂蜡的器官,但仍然允许雌性蜱虫产下可行的卵。这些无蜡卵允许向蜱虫卵注射基因编辑所需的材料。另一个主要挑战是了解蜱虫卵发育的时间。对蜱虫卵的了解如此之少,以至于我们需要确定引入CRISPR-Cas9的精确时间,以确保诱发基因变化的最大机会。”
该团队能够给卵子注射CRISPR-Cas9复合物,该复合物携带的酶能够在基因组的特定位置切割DNA,成功地删除两个不同的基因,蜱虫卵存活率为10%。另外,科学家们使用另一种形式的CRISPR-Cas9将一种肽注射到怀孕的雌蜱体内,将复合物输送到发育中的卵巢,以编辑后代的基因组。这项先前开发的技术被称为ReMOT控制,看到所有被注射的蜱虫都能存活。
“以前,没有实验室证明基因编辑在蜱虫中是可能的,”Nuss说。“有些人认为这在技术上太难完成。这是第一个证明在蜱虫中进行基因改造是可能的研究,不仅是通过一种,而是两种不同的方法。”
在证明了这一方案之后,科学家们现在可以开始编辑蜱虫的基因组,以防止莱姆病的传播,莱姆病每年在美国感染约30万人,同时还有这种微小蛛形纲动物携带的20多种其他疾病。一般来说,这些实验将涉及改变基因,希望找到影响病原体发展的调整方法,并最终使蜱虫对人类无害,这与正在进行的有关蚊子的努力类似。
Gulia-Nuss说:“拥有基因组编辑工具将使我们能够解开蜱虫基因组的一些秘密,使我们能够确定这些独特的动物如何在环境中生存,它们如何与病原体互动,以及我们如何防止蜱虫向人类和牲畜传播疾病。”
这项研究发表在《iScience》杂志上。
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